重組胰蛋白酶細胞消化液的選擇及在細胞培養液中的應用
用不同活性的兩種細胞消化液消化Hela貼壁細胞,觀察消化結果和記錄消化時間及轉接培養后的生長狀態,見表1。
細胞消化液 |
時間/min |
消化完全細胞/% |
生長狀態 |
PBS+1kU |
7 |
86 |
好 |
PBS+2kU |
6 |
80 |
好 |
PBS+5kU |
4.5 |
50 |
不好 |
PBS+10kU |
3 |
42 |
不好 |
PBS+0.01%EDTA+1kU |
3 |
90 |
好 |
PBS+0.01%EDTA+2kU |
2 |
96 |
好 |
PBS+0.01%EDTA+5kU |
1.8 |
35 |
不好 |
PBS+0.01%EDTA+10kU |
1.5 |
20 |
不好 |
表1 不同細胞消化液的細胞消化時間及消化后和轉接培養后的生長狀態
由表1可見,第一組細胞消化液是單獨使用RPT 消化貼壁細胞,在PBS+1KU和PBS+2KU組的消化時間很慢(6min以上),且由于時間過長,致使細胞損害,細胞傳代后不能正常生長;隨著RPT活性增加到5kU和10kU,消化時間縮短,但細胞毒性增加,所以RPT不能單獨使用。第二組細胞消化液是RPT和EDTA配合使用,消化時間縮短,消化后和轉接培養后細胞狀態較好。由于EDTA是化學螯合劑,主要螯合Ca2+,Mg2+,使細胞分離,細胞毒性小,能幫助RPT消化細胞。根據消化時間,消化后細胞生存能力和轉接后生長狀態,最終確定活性2KU/ml的PBS+0.01%EDTA細胞消化液最合適,見圖1。
圖1 細胞消化前后形態
a. Hela細胞消化前的形態;
b. Hela細胞消化后的形態正常,細胞分離完全(消化時間:2min);
c.轉接培養24h后的生長狀態正常。

2019年11月5日 11:17
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