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          重組胰蛋白酶細胞消化液的選擇及在細胞培養液中的應用

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            用不同活性的兩種細胞消化液消化Hela貼壁細胞,觀察消化結果和記錄消化時間及轉接培養后的生長狀態,見表1。

          細胞消化液

          時間/min

          消化完全細胞/%

          生長狀態

          PBS+1kU

          7

          86

          PBS+2kU

          6

          80

          PBS+5kU

          4.5

          50

          不好

          PBS+10kU

          3

          42

          不好

          PBS+0.01%EDTA+1kU

          3

          90

          PBS+0.01%EDTA+2kU

          2

          96

          PBS+0.01%EDTA+5kU

          1.8

          35

          不好

          PBS+0.01%EDTA+10kU

          1.5

          20

          不好

          1 不同細胞消化液的細胞消化時間及消化后和轉接培養后的生長狀態

          由表1可見,第一組細胞消化液是單獨使用RPT 消化貼壁細胞,在PBS+1KUPBS+2KU組的消化時間很慢(6min以上),且由于時間過長,致使細胞損害,細胞傳代后不能正常生長;隨著RPT活性增加到5kU10kU,消化時間縮短,但細胞毒性增加,所以RPT不能單獨使用。第二組細胞消化液是RPTEDTA配合使用,消化時間縮短,消化后和轉接培養后細胞狀態較好。由于EDTA是化學螯合劑,主要螯合Ca2+,Mg2+,使細胞分離,細胞毒性小,能幫助RPT消化細胞。根據消化時間,消化后細胞生存能力和轉接后生長狀態,最終確定活性2KU/mlPBS+0.01%EDTA細胞消化液最合適,見圖1。

          1 細胞消化前后形態

          a. Hela細胞消化前的形態;

          b. Hela細胞消化后的形態正常,細胞分離完全(消化時間:2min);

          c.轉接培養24h后的生長狀態正常。

           

           

           

           

          2019年11月5日 11:17
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