重組胰蛋白酶細胞消化液的選擇及在細胞培養液中的應用

表1 不同細胞消化液的細胞消化時間及消化后和轉接培養后的生長狀態

由表1可見，第一組細胞消化液是單獨使用RPT 消化貼壁細胞，在PBS+1KU和PBS+2KU組的消化時間很慢（6min以上），且由于時間過長，致使細胞損害，細胞傳代后不能正常生長；隨著RPT活性增加到5kU和10kU,消化時間縮短，但細胞毒性增加，所以RPT不能單獨使用。第二組細胞消化液是RPT和EDTA配合使用，消化時間縮短，消化后和轉接培養后細胞狀態較好。由于EDTA是化學螯合劑，主要螯合Ca²⁺，Mg²⁺，使細胞分離，細胞毒性小，能幫助RPT消化細胞。根據消化時間，消化后細胞生存能力和轉接后生長狀態，最終確定活性2KU/ml的PBS+0.01%EDTA細胞消化液最合適，見圖1。

圖1 細胞消化前后形態

a. Hela細胞消化前的形態；

b. Hela細胞消化后的形態正常，細胞分離完全（消化時間：2min）；

c.轉接培養24h后的生長狀態正常。