重組Kex2蛋白酶反復凍融穩定性聲明

一、試劑

供試品：重組Kex2蛋白酶（凍干粉），批號：Re170601；

測活緩沖液：50mM Tris-HCl+2mM CaCl2，pH8.0；

溶解緩沖液：20mM  NaAc-HAc，2mM CaCl2，pH 5.2。

二、儀器設備

TU-1901雙光速紫外可見分光光度計； 

SW-CJ-1D型單人凈化工作臺。 

三、實驗方法 

供試品的配制：取供試品適量，用20mM NaAc-HAc，2mM CaCl2，pH 5.2溶解至1mg/ml，取1mg/ml的供試品溶液用20mM NaAc-HAc，2mM CaCl2，pH 5.2稀釋8X，稀釋過程中動作輕柔，避免氣泡的產生，所有操作均在超凈臺中進行。 

活性測定：對蛋白進行反復凍融后測定活性，進行3次重復活性測定。  

保存條件：-20℃以下。

三、實驗步驟

取光程為1cm的帶蓋石英比色杯，加入25℃預熱過的3ml 底物溶液，按“紫外分光光度法操作規程”在405nm的波長處，調零。取供試品溶液10.0μl加入，立即計時并搖勻，在405nm的波長處測定吸光度值，每隔20s讀取吸光度，共2min。 

四、蛋白比活計算 

五、實驗結果： 

六、總結： 

Kex2反復凍融3次之后活性開始有所下降，下降到一定程度之后活性開始穩定。Kex2反復凍融5次之后活性基本穩定，比活符合標準。