重組腸激酶在2-8℃條件下14天的穩定性

一、試劑

試劑A. 25 mM Tris HCl Buffer, pH 8.0 at 25°C (稱取Tris 0.303gr, 溶解在80ml 純化水中， 25°C，用2mol/LHCl 調pH 8.0，加純化水至100ml.)  
試劑B. 重組腸激酶酶液 
2-8°C保溫箱保存的三個批次的重組腸激酶：REK161101 (10U/µl),
REK161002(10U/µl), REK160901(10U/µl).
試劑C. 底物溶液
底物蛋白溶液: 50μg/支, 1mg/ml, 儲存在 -80°C.

二、活性測定

用試劑A稀釋REK 溶液至0.1 unit /μl，取1 µl 至底物溶液中50µl (50μg/支, 1mg/ml).混勻，25 °C酶切14-16h, SDS-PAGE分析酶切結果。
單位定義：1U定義為在25℃，12h~16h之內，將0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 緩沖液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。

三、操作步驟

穩定性研究：將重組腸激酶溶液儲存在密封避光2 - 8℃冰箱中，分別在第1,3,5,7和14天時測定酶活性； 取三批次的平均值作為檢測結果。

四、結果

結果如圖1和圖2所示：
重組腸激酶溶液在密封避光2 - 8℃冰箱中保存14天后，穩定無活性損失。

圖1重組腸激酶在2 - 8℃下14天內的活性變化曲線
活性是在第1,3,5,7和14天時測定，結果為三批次的平均值

圖2 重組腸激酶在2 - 8℃下第14天時的SDS-PAGE活性分析
Lane 1, 底物; Lane2, 批次：REK161101 ; Lane 3, 批次：REK161002;
Lane 4, 批次：REK160901.