雅心重組抑肽酶(RTI16)與sigma提取抑肽酶(A1153)比較
一、實驗目的
比較雅心重組抑肽酶(貨號RTI16,批號:RTI161101)與sigma抑肽酶(貨號A1153, 批號:SLBP2656V )在比活性、吸光度、酸度、純度等方面的異同。
二、實驗方法
1、蛋白含量、比活性、吸光度測定,酸度檢測
稱取一定量的兩種酶的粉末,分別用純水溶解,配制成2.5mg/ml的酶液 ,按照吸光系數法測定蛋白含量,其中A280nm,1cm(1mg/ml)=0.84,活性測定按照SOP操作,計算比活性。將酶液稀釋成3EPU/ml,277nm下測定吸光度,要求不大于0.8。測定酶液的酸度。
2、HPLC純度測定
①選擇分子篩分析柱為TSK-GEL G2000SWXL
②該柱子的pH范圍為2.5-7.5,速度范圍為0.5-1.0ml/min(最高可為1.2),溫度范圍10-30℃,洗脫液鹽濃度小于0.5M
③檢測波長280nm
④根據以上兩點設計方法如下表:
方法 |
pH |
流速ml/min |
溫度℃ |
分子篩 |
5.8 |
1 |
25 |
⑤其他方法按照液相SOP進行操作
⑥上樣量均是20ug
⑦樣品處理:純水溶解凍干粉
三、實驗結果
1、蛋白含量、比活性、吸光度和酸度
|
蛋白含量 |
比活性EPU/mg |
吸光度 |
酸度pH |
雅心RTI |
72% |
3.71 |
0.505 |
5.0-7.0 |
Sigma抑肽酶 |
76.9% |
3.56 |
0.526 |
5.0-7.0 |
2、HPLC純度
①雅心重組抑肽酶(RTI161101)
②sigma提取抑肽酶(貨號A1153,lot number:SLBP2656V)
四、實驗結論
1.兩種蛋白在蛋白含量、比活性、吸光度和酸度方面都基本一致,其中雅心重組抑肽酶(RTI161101)比活性略高于sigma抑肽酶(A1153)。
2.HPLC純度:雅心重組抑肽酶(RTI161101)比sigma抑肽酶(A1153)峰形更集中,兩者純度均為100%。
