雅心重組抑肽酶（RTI16）與sigma提取抑肽酶（A1153）比較

一、實驗目的

比較雅心重組抑肽酶（貨號RTI16，批號：RTI161101）與sigma抑肽酶（貨號A1153, 批號:SLBP2656V ）在比活性、吸光度、酸度、純度等方面的異同。

二、實驗方法

1、蛋白含量、比活性、吸光度測定，酸度檢測

稱取一定量的兩種酶的粉末，分別用純水溶解，配制成2.5mg/ml的酶液 ，按照吸光系數法測定蛋白含量，其中A_280nm，1cm（1mg/ml）=0.84，活性測定按照SOP操作，計算比活性。將酶液稀釋成3EPU/ml，277nm下測定吸光度，要求不大于0.8。測定酶液的酸度。

2、HPLC純度測定

①選擇分子篩分析柱為TSK-GEL G2000SWXL

②該柱子的pH范圍為2.5-7.5，速度范圍為0.5-1.0ml/min（最高可為1.2），溫度范圍10-30℃，洗脫液鹽濃度小于0.5M

③檢測波長280nm

④根據以上兩點設計方法如下表：

⑤其他方法按照液相SOP進行操作

⑥上樣量均是20ug

⑦樣品處理：純水溶解凍干粉

三、實驗結果

1、蛋白含量、比活性、吸光度和酸度

2、HPLC純度

①雅心重組抑肽酶（RTI161101）

②sigma提取抑肽酶（貨號A1153，lot number:SLBP2656V）

四、實驗結論

1.兩種蛋白在蛋白含量、比活性、吸光度和酸度方面都基本一致，其中雅心重組抑肽酶（RTI161101）比活性略高于sigma抑肽酶（A1153）。

2.HPLC純度：雅心重組抑肽酶（RTI161101）比sigma抑肽酶（A1153）峰形更集中，兩者純度均為100%。