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          雅心重組抑肽酶(RTI16)與sigma提取抑肽酶(A1153)比較

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          一、實驗目的

          比較雅心重組抑肽酶(貨號RTI16,批號:RTI161101)與sigma抑肽酶(貨號A1153, 批號:SLBP2656V )在比活性、吸光度、酸度、純度等方面的異同。

          二、實驗方法

          1、蛋白含量、比活性、吸光度測定,酸度檢測

          稱取一定量的兩種酶的粉末,分別用純水溶解,配制成2.5mg/ml的酶液 ,按照吸光系數法測定蛋白含量,其中A280nm,1cm(1mg/ml)=0.84,活性測定按照SOP操作,計算比活性。將酶液稀釋成3EPU/ml,277nm下測定吸光度,要求不大于0.8。測定酶液的酸度。

          2、HPLC純度測定

          ①選擇分子篩分析柱為TSK-GEL G2000SWXL

          ②該柱子的pH范圍為2.5-7.5,速度范圍為0.5-1.0ml/min(最高可為1.2),溫度范圍10-30℃,洗脫液鹽濃度小于0.5M

          ③檢測波長280nm

          ④根據以上兩點設計方法如下表:

          方法

          pH

          流速ml/min

          溫度℃

          分子篩

          5.8

          1

          25

          ⑤其他方法按照液相SOP進行操作

          ⑥上樣量均是20ug

          ⑦樣品處理:純水溶解凍干粉

          三、實驗結果

          1、蛋白含量、比活性、吸光度和酸度

           

          蛋白含量

          比活性EPU/mg

          吸光度

          酸度pH

          雅心RTI

          72%

          3.71

          0.505

          5.0-7.0

          Sigma抑肽酶

          76.9%

          3.56

          0.526

          5.0-7.0

          2、HPLC純度

          ①雅心重組抑肽酶(RTI161101)

          ②sigma提取抑肽酶(貨號A1153,lot number:SLBP2656V)

           

          四、實驗結論

          1.兩種蛋白在蛋白含量、比活性、吸光度和酸度方面都基本一致,其中雅心重組抑肽酶(RTI161101)比活性略高于sigma抑肽酶(A1153)。

          2.HPLC純度:雅心重組抑肽酶(RTI161101)比sigma抑肽酶(A1153)峰形更集中,兩者純度均為100%。

           

           

           

           

          2019年11月5日 11:17
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