生物制藥生產過程中的AOF要求和重組胰蛋白酶的的使用優點

一、動物細胞生產過程中的AOF幾點要求

①無血清培養基：無血清，含有蛋白如：胰島素、白蛋白、傳遞蛋白、生長因子等。

②無蛋白培養基：（合成培養基）無血清、無蛋白成分，化學組分確定等特點；主要成分包括：各種必需氨基酸，小肽，維生素，微量元素，離子等

③蛋白A親和層析：用于做親和層析的蛋白A，為非抗體親和純化。

④避免蛋白A親和柱介質在反復使用過程的污染，如果使用耐堿性的蛋白A親和柱則可避免這一問題。

目前我國傳統的疫苗生產過程中使用的培養基多為小牛血清或者胎牛血清，胰蛋白酶來源于豬、牛胰腺，因國外限制牛胰蛋白酶的制備和應用，現僅用豬胰蛋白酶?，F代疫苗及抗體生產過程中使用的培養基為無血清培養基或無蛋白培養基 。

二、AOF生物藥物的發展方向

無血清培養基、無蛋白培養基及其其它無動物源性原料將深入研發、推廣和應用，以降低成本；在疫苗生產過程中，從政策上，限制或者禁止小牛血清的使用以此提高安全性；未來將加快我國非動物源性生物藥物的研發，替代傳統的第一代的動物源性的生物藥物；無血漿重組蛋白替代血液制品，如重組凝血酶替代血漿提取凝血酶、重組白蛋白替代人血漿提取的白蛋白等。 

三、疫苗抗體等生物制藥生產中的胰蛋白酶的應用

疫苗抗體等生物制藥的生產過程主要包括①接種②初期培養③貼壁階段④收獲細胞⑤擴培；其中胰蛋白酶在收獲細胞時用來處理貼壁細胞。若收獲的細胞用來再增殖，則需要加入胰蛋白酶抑制劑。

四、動物源性胰蛋白酶對細胞培養的影響以及重組胰蛋白酶在細胞培養中的使用優點

一、安全性

可能的病毒污染：目前，使用豬胰蛋白酶的疫苗生產企業要按照2010版藥典規定檢測可能的病毒含量，如豬細小病毒。

可能細菌、真菌、支原體污染：將影響細胞的生長和產品質量。

重組胰蛋白酶是基因工程重組生產，無外源性的病毒污染，生產過程不使用任何動物源原料。

二、純度

雜質：因為歷史的原因，用于組織培養的胰蛋白酶活性定為1:250，其實，1:250的胰蛋白酶中90%以上為雜質。

雜質的成分主要為來源于胰腺的脂類、蛋白和核酸等，在胰蛋白酶處理細胞的過程中，可能會透過細胞膜，可能對細胞的生長形成影響，特別是在科研中，用細胞來鑒定一些活性物質的作用時，可能會影響真實效果的檢測。

重組胰蛋白酶純度高，比活高；宿主蛋白殘留小于生物制品限度要求。

三、消化效果與活性相關

活性：雖然用于組織培養的胰蛋白酶活性定為1:250，實際上，其活性卻不固定，有的可能不到1:250，有的卻可以高達1:1000--1:2000。因此，如果都用常規的配制方法如：0.25%來配制的話，將會使胰蛋白酶消化液的活性相差5倍甚至10倍。

弊端：胰蛋白酶的活性直接影響細胞消化結果和消化后細胞的生長。

活性過低：細胞消化不好，細胞消化所需時間長；

活性過高：細胞消化太快（比如：不到30s），易于消化過度，其危害是：輕則影響細胞生長，重則細胞死亡。消化后轉接細胞密度減小，規定時間內生長不起來。  

重組胰蛋白酶可按照活性單位投料，完全避免使用過程中過多或者過少投料。