重組腸激酶和目的蛋白分離純化推薦方案

       重組腸激酶專為切割重組表達融合蛋白設計，分為兩個類型：rEK-B 和rEK-H ，分別為不含有His-6和含有His-6 重組標簽。

       雅心生物目前生產的為rEK-B.不含His標簽，相對比活高，約為20000 Unit/mg pro，按照活性定義，1 Unit 可以切割0.5mg目的蛋白，則酶切液中的重組腸激酶相對于目的蛋白的含量為萬分之一（0.01%）。所以，在進一步的實驗中，可以不考慮其對下游實驗的影響，建議可以不純化。

 如果確實需要去除rEK，建議的去除方法如下：

       如果使用親和層析，可以利用胰蛋白酶抑制劑親和膠，由于腸激酶是一種絲氨酸蛋白酶，胰蛋白酶抑制劑可以與腸激酶結合，從而達到純化目的。建議利用離子交換層析分離去除微量的腸激酶。

       PH8.0條件下，腸激酶與DEAE膠結合，并且在0.15M NaCl中可以被洗脫?？梢岳媚康牡鞍着c腸激酶電荷以及與DEAE膠的結合以及洗脫的不同條件將二者進行分離。