V8蛋白酶 V813

CAS：66676-43-5  EC：3.4.21.19

【V8蛋白酶｜產品簡介】

酶切位點：V8蛋白酶屬于絲氨酸蛋白酶家族，能特異水解谷氨酸（Glutamic acid、E）或天冬氨酸（Aspartic acid、D）殘基羧基側肽鍵。在pH 7.8的NH4HCO3和pH 4.0的CH3COONH4緩沖液中識別并切割Glu羧基端肽鍵，在pH 7.8的磷酸鹽緩沖液中識別并切割Glu或Asp羧基端肽鍵，且對Glu的水解速率高于Asp。

產品應用：在進行蛋白質酶切測序、肽圖譜分析和肽質量指紋圖譜分析中使用時，可以單獨使用或與其他蛋白酶混合使用。

基本特性：V8蛋白酶在pH4.0-10.0之間均有活性，最適pH為8.0-8.5。V8蛋白酶的抑制劑有二異丙基氟磷酸（DFP）、α2-巨球蛋白和Nα-P-甲苯磺?；?L-賴氨酸氯甲基酮（TLCK）。

【V8蛋白酶｜產品特性】

備注：在25℃，pH7.8的條件下，每分鐘催化底物（Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide）生成1μmol對硝基苯胺（4-nitroaniline）所需要的酶量為一個酶活性單位。

【V8蛋白酶｜使用方法】

使用前注意:可按使用量分裝以最大限度避免污染或自切。
目的蛋白溶解:用酶切buffer溶解目的蛋白，例如25-50 mM NH4HCO3  pH 7.8，若溶解度不好對目的蛋白變性，添加尿素、SDS、DTT或加熱。尿素和SDS對V8蛋白酶的影響見表一。

酶切:V8蛋白酶和目的蛋白推薦比例為1/20-1/100（W/W)，25℃或37℃酶切2-18h。
 
表一：V8蛋白酶在含有不同濃度變性劑，尿素25℃2h，SDS25℃12h的穩定性
（注：V8蛋白酶0.5mg/ml，50mM Tris-HCl pH8.0）

應用舉例：重組V8酶切胰島素
   100 μl胰島素溶液+198 μl 0.4 M Tris-HCl pH 8.0+60 μl 0.1%V8蛋白酶液+超純水補至400 μl。37 ℃水浴反應2 h，加6 μl磷酸溶液終止反應，C18柱分析：

A:酶切之前

B:酶切之后

【V8蛋白酶｜儲存運輸】

儲存穩定性：重組V8蛋白酶凍干粉存于2-8℃，24個月穩定；

溶解后穩定性：用水或50 mM Tris-HCl pH 8.0溶解以后存于-20℃ 以下（1mg/ml），6個月穩定；用水或50 mM Tris-HCl pH 8.0溶解以后存于4℃（1mg/ml，無菌），2個月穩定；用50 mM Tris-HCl pH 8.0溶解以后存于25℃或37℃（0.5mg/ml）12h，活性可維持85%以上；溶解后溶液可反復凍融10次無活性損失。

運輸穩定性：藍冰保溫運輸，活性穩定。

【V8蛋白酶｜產品優勢】

序列分析純胰蛋白酶：特異性高，穩定性好。
無動物源性：重組生產，無外源性的病毒污染，生產過程不使用任何動物源原料。

質量穩定：批量生產，可保證穩定連續的批次生產；產品批次間無差異，質量穩定。

純度高：比活高；宿主蛋白殘留小于生物制品限度要求。

凍干粉：易于儲存和運輸。

符合法規要求：生產設備和生產環境符合相關法規要求，生產過程完全遵循NSF ISO 9001:2015質量體系并符合GMP指導原則。

質量文件完整：按客戶需求，可提供相關法規支持文件。


【V8蛋白酶｜相關產品】

重組腸激酶；序列分析純羧肽酶B；序列分析純胰蛋白酶；序列分析純糜蛋白酶。