重組腸激酶 REK08
CAS:9017-74-8 EC:3.4.21.9
【重組腸激酶|產品簡介】
酶切位點:腸激酶可以切割含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端肽鍵:天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸(DDDDK)。
氨基酸序列:雅心重組牛腸激酶是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段,氨基酸序列與牛腸激酶輕鏈一致。
酶學性質:腸激酶可去除位于蛋白質N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合標簽。
基本特性:該酶經HPLC純化,純度高,特異性高,不含其他蛋白酶,可以在較寬pH范圍(4.5-9.5)和較寬溫度范圍內有效切割融合蛋白。
【重組腸激酶|產品特性】
來源 |
重組大腸桿菌 |
產品外觀 |
澄清、無色至淡黃色液體 |
活性 |
≥ 5.0 U/µl |
純度(蛋白電泳) |
單一主條帶 |
分子量(蛋白電泳) |
25.8 ±2.6kDa |
備注:1U定義為在25℃,12h~16h之內,將0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 緩沖液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。
【重組腸激酶|使用方法】
25℃酶切條件:
反應體系:
反應條件:25℃過夜酶切,或完全酶切需16-24h,用SDS-PAGE檢測酶切效果。
結果驗證:使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物,反應溫度是25℃,酶切不同時間梯度(8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h)
4℃低溫酶切條件:4℃能對底物進行有效酶切,但需要將酶切時間延長至 48-64h,或增加 2-3 倍酶量。
酶切結果驗證:使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物,反應溫度是4℃,酶切不同時間梯度(8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h)
酶切優化和放大:
優化:可以對酶切條件進行優化,例如緩沖液 pH,融合蛋白濃度,EK的量,以及酶切時間,使融合蛋白能在穩定條件下被酶切,用 SDS-PAGE 檢測酶切效果。
放大:選擇優化后的反應條件,按該條件等比例放大,用 SDS-PAGE 檢測酶切效果。
去除重組腸激酶的方法:使用胰蛋白酶抑制劑親和層析(例如 sigma T0637)去除重組腸激酶。
【重組腸激酶|儲存運輸】
儲存穩定性:-20℃下,12個月穩定;25℃,一周內,無活性損失。緩沖體系:50mM Tris-HCl,pH8.0,250 mM NaCl,2 mM Ca 2+,50%甘油。反復凍融5次,無活性損失。
運輸穩定性:藍冰保溫運輸,活性穩定。
【重組腸激酶|產品優勢】
特異性:特定的蛋白酶,切割前面含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點:天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-賴氨酸(DDDDK)。
無動物源性:重組生產,無外源性的病毒污染,生產過程不使用任何動物源原料。
質量穩定:批量生產,可保證穩定連續的批次生產;產品批次間無差異,質量穩定。
純度高:不含其他蛋白酶,無非特異性切割。
符合法規要求:生產設備和生產環境符合相關法規要求,生產過程完全遵循NSF ISO 9001:2015質量體系并符合GMP指導原則。
質量文件完整:按客戶需求,可提供相關法規支持文件。
【重組腸激酶|注意事項】
酶切溫度:不建議37℃條件下酶切,可能會有非特異性酶切出現。
酶切條件:在>200mM 咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油條件下,酶切效果受影響,可參照以下推薦方法進行酶切:
推薦方法:為獲得理想酶切結果,請將樣品透析到25mM Tris-HCl 8.0緩沖液中,再進行酶切。若不便透析,可將樣品稀釋到咪唑含量在100mM以下,NaCl濃度在50mM以下,甘油濃度小于5%以下進行酶切,酶的用量與蛋白的比例不變(即1U酶切500µg蛋白)。
如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種,且不便去除,此時適當增加酶量或延長酶切時間,也可達到較好酶切效果。
磷酸鹽的影響:磷酸鹽對Enterokinase有很強的抑制作用,痕量的磷酸鹽都會嚴重影響Enterokinase的活性,因此在酶切體系內不能存在磷酸鹽。
去除腸激酶:本品是具有高酶活力重組腸激酶,切割蛋白使用量少,可不考慮除去。后續如需去除重組腸激酶,可用陰離子交換樹脂(eg.DEAE-FF)對其進行洗脫。推薦洗脫條件如下:
平衡緩沖液:25 mM Tris-HCl pH 8.0
洗脫緩沖液:25 mM Tris-HCl pH 8.0,含100 mM NaCl
酶切效果:蛋白酶切效果不好,可適當增加酶量,或適當延長酶切時間。
【重組腸激酶|相關產品】
重組羧肽酶B;序列分析純胰蛋白酶;重組人胰蛋白酶;重組抑肽酶。

-
產品規格100U;500U;1000U;10KU;100KU;1MU