重組腸激酶 REK08

CAS：9017-74-8  EC：3.4.21.9

【重組腸激酶｜產品簡介】

酶切位點：腸激酶可以切割含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端肽鍵：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸（DDDDK）。

氨基酸序列：雅心重組牛腸激酶是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段，氨基酸序列與牛腸激酶輕鏈一致。

酶學性質：腸激酶可去除位于蛋白質N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標簽。

基本特性：該酶經HPLC純化，純度高，特異性高，不含其他蛋白酶，可以在較寬pH范圍（4.5-9.5）和較寬溫度范圍內有效切割融合蛋白。

【重組腸激酶｜產品特性】

備注：1U定義為在25℃，12h~16h之內，將0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 緩沖液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。

【重組腸激酶｜使用方法】

25℃酶切條件：

反應體系：

反應條件：25℃過夜酶切，或完全酶切需16-24h，用SDS-PAGE檢測酶切效果。

結果驗證：使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物，反應溫度是25℃，酶切不同時間梯度（8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h）

4℃低溫酶切條件：4℃能對底物進行有效酶切，但需要將酶切時間延長至 48-64h，或增加 2-3 倍酶量。

酶切結果驗證：使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物，反應溫度是4℃，酶切不同時間梯度（8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h）

酶切優化和放大：

優化：可以對酶切條件進行優化，例如緩沖液 pH，融合蛋白濃度，EK的量，以及酶切時間，使融合蛋白能在穩定條件下被酶切，用 SDS-PAGE 檢測酶切效果。

放大：選擇優化后的反應條件，按該條件等比例放大，用 SDS-PAGE 檢測酶切效果。

去除重組腸激酶的方法：使用胰蛋白酶抑制劑親和層析（例如 sigma T0637）去除重組腸激酶。

【重組腸激酶｜儲存運輸】

儲存穩定性：-20℃下，12個月穩定；25℃，一周內，無活性損失。緩沖體系：50mM Tris-HCl，pH8.0，250 mM NaCl，2 mM Ca 2+，50%甘油。反復凍融5次，無活性損失。

運輸穩定性：藍冰保溫運輸，活性穩定。

【重組腸激酶｜產品優勢】

特異性：特定的蛋白酶，切割前面含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點：天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-賴氨酸(DDDDK)。
無動物源性：重組生產，無外源性的病毒污染，生產過程不使用任何動物源原料。

質量穩定：批量生產，可保證穩定連續的批次生產；產品批次間無差異，質量穩定。

純度高：不含其他蛋白酶，無非特異性切割。

符合法規要求：生產設備和生產環境符合相關法規要求，生產過程完全遵循NSF ISO 9001:2015質量體系并符合GMP指導原則。

質量文件完整：按客戶需求，可提供相關法規支持文件。

【重組腸激酶｜注意事項】

酶切溫度：不建議37℃條件下酶切，可能會有非特異性酶切出現。

酶切條件：在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油條件下，酶切效果受影響，可參照以下推薦方法進行酶切：

推薦方法：為獲得理想酶切結果，請將樣品透析到25mM Tris-HCl 8.0緩沖液中，再進行酶切。若不便透析，可將樣品稀釋到咪唑含量在100mM以下，NaCl濃度在50mM以下，甘油濃度小于5%以下進行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變（即1U酶切500µg蛋白）。

如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時適當增加酶量或延長酶切時間，也可達到較好酶切效果。

磷酸鹽的影響：磷酸鹽對Enterokinase有很強的抑制作用，痕量的磷酸鹽都會嚴重影響Enterokinase的活性，因此在酶切體系內不能存在磷酸鹽。

去除腸激酶：本品是具有高酶活力重組腸激酶，切割蛋白使用量少，可不考慮除去。后續如需去除重組腸激酶，可用陰離子交換樹脂（eg.DEAE-FF）對其進行洗脫。推薦洗脫條件如下：

平衡緩沖液：25 mM Tris-HCl pH 8.0

洗脫緩沖液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，含100 mM NaCl

酶切效果：蛋白酶切效果不好，可適當增加酶量，或適當延長酶切時間。

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重組羧肽酶B；序列分析純胰蛋白酶；重組人胰蛋白酶；重組抑肽酶。